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GB／T 5750.12-2023 生活饮用水标准检验方法 第12部分：微生物指标.pdf4.2.5.1结果报告
根据显蓝色荧光的孔数，对照表2查出孔数对应的每毫升样品中的菌落总数的MPN值。如果样 品进行了稀释，读取的结果应乘以稀释倍数并报告之，结果以MPN/mL表示。如果所有孔均未显荧 光，则可报告为菌落总数未检出
基础土方开挖施工方案表2 菌落总数MPN表
表2菌落总数MPN表（续）
表2菌落总数MPN表（续）
选择菌落总数在<738MPN/mL范围内的稀释度，如果只有一个稀释度的结果符合此范围，则 是乘以稀释倍数报告结果。
稀释倍数报告结果， 若所有稀释度的培养盘
4.2.6.1阳性对照
每新购或新配制一批培养基，都应做阳性对照，可选用有证的菌落总数质控标样，按其标准证书要 求配制标准样品。接种培养步骤应符合4.2.4.2的要求，按照4.2.4.3进行结果计数，试验数据处理应符 合4.2.5的要求。计数结果与标样的标准值相比，生长率应≥0.7。
每新购或新配制一批培养基，都应做阴性对照，用1mL无菌水代替实际水样。接种培养步骤应符 合4.2.4.2的要求，结果计数应符合4.2.4.3的要求，试验数据处理应符合4.2.5的要求。如无荧光产生 则为阴性
经36C土1C培养24h，发酵乳糖产酸产 气、经证实试验和革兰氏染色检测水中总大肠菌群的 方法
5.1.2培养基与试剂
5.1.2.1乳糖蛋白陈培养液
5.1.2.1.1成分
按如下成分配制： a）蛋白陈 10.0 g b）牛肉膏 3.0g c）乳糖 5.0 g d）氯化钠 5.0 g e) 溴甲酚紫乙醇溶液(16g/L) 1 mL f）纯水 1000ml
5.1.2.1.2制法
将蛋白陈、牛肉膏、乳糖及氯化钠溶于纯水中，调整pH为7.2～7.4，再加入1mL16g/L的漠甲酚 紫乙醇溶液，充分混匀，分装于装有小倒管的试管中，经115C高压蒸汽灭菌20min后，于0℃～4°℃ 冷藏避光保存
二倍浓缩乳糖蛋白陈培养
除纯水为500mL，其他成分应符合5.1.2.1的要
5.1.2.3伊红美蓝培养基
5.1.2.3.1成分
按如下成分配制： a）蛋白陈 10.0g b）乳糖 10.0 g c）磷酸氢二钾 2.0 g d）琼脂 20.0 g~30.0g e）纯水 1 000 mL f） 伊红水溶液(20.0g/L) 20 mL g）美蓝水溶液（5.0g/L) 13 mL
5.1.2.4.1结晶紫染色液
5.1.2.4.1.1成分
按如下成分配制： a）结晶紫 1.0 g b) 乙醇[(CHsOH)=95%] 20 mL C 草酸铵溶液（10.0g/L) 80 mL
将结晶紫溶于乙醇中，然后与草酸铵溶液混合。 注：结晶紫不可用龙胆紫代替，前者是纯品，后者不是单一成分，易出现假阳性。结晶紫溶液放置过久会产生沉流 不能再用。
5.1.2.4.2.2制法
5.1.2.4.3脱色剂
乙醇[（CHOH)=95%]
5.1.2.4.4沙黄复染液
5.1.2.4.4.1成分
按如下成分配制： a）沙黄 0.25g b）乙醇[(CHsOH)=95%] 10mL c）纯水 90mL 5.1.2.4.4.2制法 将沙黄加人乙醇中，待完全溶解后加入纯水。 5.1.2.4.5染色法 5.1.2.4.5.1将培养18h～24h的培养物涂片。 5.1.2.4.5.2将涂片在火焰上固定，滴加结晶紫染色液，染1min，水洗。 5.1.2.4.5.3滴加革兰氏碘液，作用1min，水洗。 5.1.2.4.5.4滴加脱色剂，摇动玻片，直至无紫色脱落为止，约30s，水洗。 5.1.2.4.5.5加沙黄复染液，复染1min，水洗.待干，镜检。
5.1.3.1培养箱：36℃±1℃。 5.1.3.2冰箱。 5.1.3.3电子天平。 5.1.3.4显微镜。 5.1.3.5平Ⅲ：直径9cm。 5.1.3.6试管。 5.1.3.7无菌吸管：1mL、10mL。 5.1.3.8锥形瓶。 5.1.3.9小倒管。 5.1.3.10载玻片。
5.1.4.1.1用无菌吸管或移液器吸取10mL水样接种到10mL双料乳糖蛋白陈培养液中，取1mL水 样接种到10mL单料乳糖蛋白豚培养液中，另取1mL水样注人到9mL无菌生理盐水中，混匀后取 mL（即0.1mL水样）注人到10mL单料乳糖蛋白陈培养液中，每一稀释度接种5管；对已处理过的 出厂自来水，需经常检验或每天检验一次的，可直接接种5份10mL水样双料培养基，每份接种10mL 水样。 5.1.4.1.2检验水源水时，如污染较严重，应加大稀释度，可接种1mL、0.1mL、0.01mL，甚至0.1mL、 0.01mL、0.001mL，每个稀释度接种5管单料乳糖蛋白陈培养液，每个水样共接种15管。接种1mL 以下水样时，应作10倍递增稀释后，取1mL接种，每递增稀释一次，换用1支1mL无菌吸管。 5.1.4.1.3将接种管置于36°℃土1°C培养箱内，培养24h土2h，如所有乳糖蛋白陈培养管都不产气产 酸，则可报告为总大肠菌群未检出，如有产酸产气者，则按下列步骤进行。
5.1.4.2分离培养
将产酸产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上，于36℃土1℃C培养箱内培养18h～24h， 观察菌落形态，挑取符合下列特征的菌落进行革兰氏染色镜检： 深紫黑色、具有金属光泽的菌落； 紫黑色、不带或略带金属光泽的菌落； 淡紫红色、中心较深的菌落
5.1.4.3证实试验
经上述染色镜检为革兰氏阴性无芽孢杆菌，同时接种乳糖蛋白陈培养液，置36°℃士1C培养箱 24h士2h.有产酸产气者.即证实有总大肠菌群存在
根据证实为总大肠菌群阳性的管数，查MPN表（见表3和表4)，报告每100mL水样中的总大 MPN值。稀释样品查表后所得结果应乘稀释倍数。如所有乳糖发酵管均为阴性时，可报告总 首群未检出
表3 总大肠菌群5管法MPN表
表4总大肠菌群15管法MPN表（续）
表4总大肠菌群15管法MPN表（续）
表4总大肠菌群15管法MPN表（续）
用孔径为0.45μm的微孔滤膜过滤水样后，将滤膜贴在选择性培养基上培养后，能形成典型菌落， 经革兰氏染色和证实试验，来检测水中总大肠菌群的方法
DB45／T 2532-2022标准下载5.2.2.1.1成分
5.2.2.1.2制法
5.2.2.1.2.1
先将琼脂加到500mL纯水中，煮沸溶解，于另500mL纯水中加人磷酸氢二钾、蛋白陈、酵母浸膏 和牛肉膏，加热溶解，倒入已溶解的琼脂，补足纯水至1000mL，混匀后调pH为7.2～7.4，再加人乳糖， 分装，经115C高压蒸汽灭菌20min后，于0℃～4C冷藏保存。 本培养基也可不加琼脂，制成液体培养基，使用时加2mL～3mL于灭菌吸收垫上，再将滤膜置于 垫上培养。
5.2.2.1.2.2平血培养基的制法
沿江高速公路广州段实施性施工组织设计5.2.2.2乳糖蛋白陈培养
应符合5.1.2.1的要求。