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GB／T 40977-2021 家用洗衣机 降低微生物污染测试方法.pdf

表3溴棕三甲铵琼脂/溴化士六烷基三甲铵琼脂的成分

5.2.2.1.5麦芽浸粉琼脂（MEA）

ZJM 008-3219-2019 双面同花数码喷墨印花桑蚕丝围巾麦芽浸粉琼脂（MEA)的成分见表5。

表5麦芽浸粉琼脂（MEA）的成分

5.2.2.1.6胰蛋白陈大豆肉汤（TSB

胰蛋白陈大豆肉汤（TSB)的成分见表6

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表6胰蛋白陈大豆肉汤（TSB）的成分

5.2.2.2培养基和溶液用水

重蒸水或去离子水都可以使用，但是去离子水使用前应进行灭菌

稀释液的成分见表7。

微生物的生长需要合适的培养基和中和剂， 一种宜采用的中和剂的成分见表8

影响最终结果的前提下也可以使用其他的中和剂

使用IEC60456:2010中IECA*洗涤剂基粉

5.2.3.2用水量预试验

需要进行预试验确定用水量，以此计 预试验条件应满足以下内容 a） 运行待测程序3次。 b 使用与主试验中相同量的负载。 C 3次试验均使用干的基本负载（“基本负载”符合IEC60456：2010的要求）。 d) 每公斤基本负载使用2g洗涤剂。 e 洗涤剂应放在洗衣机的洗涤剂槽中。如果没有洗涤剂槽，按照制造商的说明放置洗涤剂，如果 没有说明，所有的洗涤剂加人洗衣机的内桶底部。 洗涤剂会降低表面张力，从而影响浸泡效果， f 计算3次平行试验主洗的平均用水量。主洗用水量依据IEC60456：2010进行试验，

5.2.3.3主洗洗涤剂用量

洗涤剂用量按照主洗用水量2g/L进行添加。 如果有洗涤剂槽，洗涤剂槽上应标明为放置洗涤剂处。 如果没有洗涤剂槽，应按照制造商的说明放置洗涤剂，如果没有说明，所有的洗涤剂加人洗衣机的 内桶底部

除非另有说明，测试条件、材料、设备、仪器应与IEC60456：2010保持一致，操作要符合微生物实 作规程。

菌的培养箱应能保持温度在（36土1)℃.酵母菌应

灭菌锅应能对设备及相关用品在121℃～124℃条件下进行至少15min或者134℃137℃条件 下至少 5 min 的饱和蒸汽灭菌。

微生物载体是用ISO2267中的标准棉织物制作的样块，尺寸为1.0cm×1.0cm。 样块在使用前应在蒸馏水中煮3次，灭菌，室温下干燥并保持无菌，

移液器的标注容量应在0.1mL~10.0mL。

用的电子混勾器可用于本文件，适宜的商业产品的

5.3.7离心机、离心管

应能在使用50mL离心管室温条件下提供200

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基本负载应包含IEC60456：2010中列出的棉质基本负载。预处理的要求和所需质量的负载含有 的种类和数量应按照该标准的要求。 基本负载使用次数应不超过80次。不要求符合IEC60456：2010附录J的要求。 每次试验前，基本负载应在不加洗涤剂的条件下洗涤，以去除残留的洗涤剂，然后应用90℃的水处 理10min，干燥后保存在适宜条件下避免再次污染

5.3.9温度变化测试设备

表9温度传感器的具体要求

5.3.10用水量测试设备

测试设备应符合IEC60456：2010中5.5的要求

含菌试验样块用于测定家用洗衣过程中微生物的减少和可能存在的微生物交叉污染 除非另有说明，试验条件，材料，设备和仪器应符合IEC60456：2010的要求。

6.2待测洗衣机的准备

每次试验前，待测样机应用85℃或90℃的程序进行预处理， 如果样机没有上述程序，应直接在洗衣机中加人不少于50L的，温度不低于90℃的水，运行2个 测试程序。 之后应运行2个冷水漂洗周期以冷却洗衣机。 注：可以通过合适的方法监控样机的卫生状况，比如用接触平板

6.3试验微生物和含菌试验样块的准备

主物和相应的保藏菌种应按照以下要求制备和保

6.3.1.1白色念珠菌工作培养物

保藏菌种应在MEA平板上至少划线传代2次，获得白色念珠菌的工作培养物。 第一代培养物在（30士1)℃条件下培养42h～48h后，以同样的方式转接第二代培养物并培养，第 二代培养物用于制备含菌试验样块。 按照同样的方式从第二代培养物上制备第三代培养物，第三代培养物用于有效性分析（见6.5）。不 制备第四代培养物。 如果在某些特定时间里不能制备二代培养物，且培养物在培养箱里培养时间没超过72h，可以用 72h的培养物进行后续传代。 应再制备48h的培养物

6.3.1.2酵母菌悬液（白色念珠菌）的制备

保藏菌种在TSA平板上至少划线传代两次，获得恶臭假单胞菌和金黄色葡萄球菌的工作培养物。 第一代培养物在（36士1)℃条件下培养24h后，以同样的方式转接第二代培养物并培养，第二代培 养物用于制备含菌试验样块。 按照同样的方式从第二代培养物上制备第三代培养物，第三代培养物用于有效性分析（见6.5）。不 制备第四代培养物。

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如果在某些特定时间重不能制备二代培养物，假如培养物在培养箱重培养时间没超过48h，可以 用48h的培养物进行后续传代。这种情况下，在进行下一步试验前，应再制备24h的培养物

6.3.2含菌试验样块

5.3.2.1微生物载体

微生物载体要求见5.3.4

6.3.2.2载体的接种

母个菌种每次试验使用5个微生物载体， 微生物载体浸人试验用微生物菌悬液中，用无菌镊子夹着反复旋转，使载体完全浸湿并除去所有 气泡。 微生物载体应在菌悬液中放置20min～30min，然后用镊子转移至开盖培养皿中，置于培养箱中 至少干燥3h。细菌干燥温度为（36土1)℃，酵母菌干燥温度为（30士1)℃。 注：为了保证干燥3h后的效果，有必要确保培养箱内部的最小湿度。 每个接种的载体用无菌镊子分别转移至袋子中，每种微生物的5个载体应放置在5个棉袋中。 另外，每种微生物两个接种的载体应用于有效性试验（见6.5）。 含菌试验样块放置在有盖培养皿中，置于室温下保存，干燥后一周内使用

每个菌种每次试验使用5个微生物载体， 微生物载体浸人试验用微生物菌悬液中，用无菌镊子夹着反复旋转，使载体完全浸湿并除去所有 气泡。 微生物载体应在菌悬液中放置20min～30min，然后用镊子转移至开盖培养皿中，置于培养箱中 至少干燥3h。细菌干燥温度为（36土1)℃，酵母菌干燥温度为（30士1)℃。 注：为了保证干燥3h后的效果，有必要确保培养箱内部的最小湿度。 每个接种的载体用无菌镊子分别转移至袋子中，每种微生物的5个载体应放置在5个棉袋中。 另外，每种微生物两个接种的载体应用于有效性试验（见6.5）。 含菌试验样块放置在有盖培养血中，置于室温下保存于燥后一周内使用

根据制造商的说明选择主测试程序和试验负载的规格。 将干燥的负载平均分为两份，将其中一份放入洗衣机内桶中，将含菌试验样块（见6.3.2.2）和数据 采集器放置在中间，然后放人另一半负载。不必按照IEC60456：2010的方法装载。 运行测试程序，按照6.4.2分析含菌试验样块。 每个测试程序至少进行3次试验

5.4.2试验微生物的回收

6.4.2.1微生物平板

6.5.1试验之前微生物数量N,（阳性对照）

十数按照6.4.2进行。两个含菌试验样块微生物数量经过计算的平均值（1og10）是计算试验后（1 7.1)含菌试验样块微生物减少值的基础

6.5.2阴性对照（交叉污染）

为了测定文。 主物载体的选择性条件不同，对于每 本应选择合适的培养基平板（见5.2.2）

为了确保水质的微生物含量，取洗涤过程中的1mL水样，用相关的培养基进行分析（见5.2.2） 用涂布或者倾注平板法，培养条件如上文所述。

6.5.4主洗水量的确定

则试程序每次测试的主洗水量 2010的方法进行测试， 对于每一个试验循环，主试验中 用水量的差别不应超过土15%

每种微生物每个试验循环中减少的对数值按照如下方式计算： 每种微生物减少的对数值=log(N。/N) 式中： N。——阳性对照微生物数量的平均值（见6.5.1)； N一试验后，5个含菌试验样块上微生物数量的平均值。 标准偏差应根据至少3次试验的N。、N和对数减少值进行计算

每种微生物每个试验循环中减少的对数值按照如下方式计算： 每种微生物减少的对数值=log（N。/N） 式中： N。—一阳性对照微生物数量的平均值（见6.5.1)； N一试验后，5个含菌试验样块上微生物数量的平均值。 标准偏差应根据至少3次试验的N。、N和对数减少值进行计算

对照无菌样块培养一段时间之后，如果有任何微生物的生长应以CFU/无菌微生物载体的形式 10

对照无菌样块培养一段时间之后，如果有任何微生物的生长应以CFU/无菌微生物载体的形

声明。 如果没有生长，应表明小于100CFU/无菌微生物载体

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试验报告应包含下述信息： ·试验日期； 根据IEC60456：2010确定的洗衣机类型； 试验程序； ·负载质量（kg）； ·环境条件：电压、环境温湿度； 使用的试验微生物； · 含菌试验样块的干燥时间； ·试验前每种微生物含菌试验样块上的数量； ·试验后每种微生物含菌试验样块上的数量； 每种微生物的减少值（包含标准偏差）； · 无菌载体上微生物的转移； 试验中水温变化曲线； 。含菌试验样块的产品数据（对于商品化的含菌试验样块：货号，生产数据，质量控制日期） 试验报告可以含有额外的信息，例如，依据IEC60456：2010确定的参数： · 用电量； 用水量（总用水量、主洗用水量、漂洗用水量）； ·程序时间； 进水温度； 生物控制样块的使用时间/使用前生物控制样块的干燥时间

试验报告应包含下述信息： 试验日期； 根据IEC60456：2010确定的洗衣机类型； 试验程序； 负载质量（kg）； 环境条件：电压、环境温湿度； 使用的试验微生物； 含菌试验样块的干燥时间； 试验前每种微生物含菌试验样块上的数量； 试验后每种微生物含菌试验样块上的数量； 每种微生物的减少值（包含标准偏差）； 无菌载体上微生物的转移； 试验中水温变化曲线； 含菌试验样块的产品数据（对于商品化的含菌试验样块：货号，生产数据，质量控制日期）， 试验报告可以含有额外的信息，例如，依据IEC60456：2010确定的参数： 用电量； 用水量（总用水量、主洗用水量、漂洗用水量）； 程序时间； 进水温度； 生物控制样块的使用时间/使用前生物控制样块的干燥时间

内部研发使用危险等级1级的微生物测试家用洗衣机中微生物的减少

本试验方法充许使用危险等级1级的微生物用于预评估或者内部研发 洗衣机最终的降低微生物污染性能应按照本文件中的方法进行

虽然本方法采用的危险等级1级的微生物不是病原菌，相关操作还是需要受过无菌操作专业培训 人员进行。盲目的操作可能会影响试验结果甚至造成结果的偏离。 允许危险等级1级的微生物有少量意外的溢出或者丢弃，但试验室宜将琼脂平板和缓冲液等高压 菌处理后再丢弃或者处理。 清洗的液体可不经过无菌处理，直接排放

A.3.1含菌试验样块采用的微生物

试验采用下述微生物，前两种为细菌，后一种为酵母菌： 荧光假单胞菌（ATCC17397/DSM50091）； 阿尔莱特葡萄球菌（ATCC43957/DSM20672）； 。酿酒酵母（ATCC9763/DSM1333）。 注：对于含菌试验样块可供选择的供应商，参见附录B。

A.3.2培养基和溶液用水

A.3.3培养基和溶液

A.3.3.1胰蛋白陈大豆琼脂（TSA）

见 5.2.2.1.1

A.3.3.2沙氏葡萄糖琼

沙氏葡萄糖琼脂的成分见表A.1。

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表A1沙氏葡萄糖琼脂的成分

A.3.3.3沙氏葡萄糖琼脂（含氯霉素）

A.3.3.7哥伦比亚CAN琼脂的成分

哥伦比亚CAN琼脂的成分见表A.2。

表A.2哥伦比亚CAN琼脂的成分

A.3.3.8胰蛋白陈大豆肉汤（TSB）

见5.2.2.1.6，

见5.2.2.1.6

微生物载体是用符合ISO 1.0cm×1.0cm或者直径为2.5c 照5.3.4的描述，使用前用蒸馏水煮 樂井保持无菌状态

见5.3.6。 A.4.6离心机 见5.3.7。 A.4.7负载 见5.3.8。 A.4.8水温测试设备 见5.3.9。 A.4.9 用水量测试设备 见5.3.10。

含菌试验样块用于测定家用洗衣过程中微生物的减少和可能存在的微生物交叉污染。 14

含菌试验样块用于测定家用洗衣过程中微生物的减少和可能存在的微生物交叉污 14

除非另有说明，试验条件、材料、设备和仪器应符合IEC60456：2010的要求。 5.2洗衣机的准备

A.5.2洗衣机的准备

1.5.3试验微生物和含菌试验样块的准备

含菌试验样块可以现用现准备，也可以使用备用品

试验用微生物和保藏培养物应按照！

A.5.3.1.1酿酒酵母工作培养物

A.5.3.1.2酵母菌的制各

按照6.3.1.2中白色念珠菌的方法制备

3荧光假单胞菌和阿尔莱特葡萄球菌工作培养

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荧光假单胞菌和阿尔莱特葡萄球菌工作培养物的制备按照6.3.1.3中恶臭假单胞菌和金黄色葡萄 球菌的制备方法。

A.5.3.1.4菌悬液

按照6.3.1.4中恶臭假单胞菌和金黄色葡萄球的

A.5.3.2含菌试验样块

A.5.3.2.1微生物载体

A.5.3.2.2载体的接种

每个菌种每次试验使用5个微生物载体， 微生物载体浸人试验用微生物菌悬液中，用无菌镊子夹着反复旋转，使载体完全浸湿并除去所有 气泡。 微生物载体在菌悬液中放置20min～30min，然后用镊子转移至开盖培养Ⅲ中，置于培养箱中至 少十燥3h。细菌十燥温度为（36士1）℃，酵母菌十燥温度为（30士1）℃。 注：为了保证干燥3h后的效果，有必要确保培养箱内部的最小湿度。 每个接种的载体用无菌镊子分别转移至袋子中，每种微生物的5个载体应放置在5个棉袋中。 含菌试验样块放置在有盖培养皿中，置于室温下保存，干燥后一周内使用。 如果使用商品化含菌试验样块，使用前应保存在冰箱中，每次试验中每个测试菌种使用的共5个含 菌试验样块应用无菌镊子分别转移至5个棉布袋中。 另外，每种微生物接种两个载体用于有效性分析（见A.5.5）

A.5.4.2测试微生物的回收

测试程序结束之后，为了确定含菌试验样块上微生物的数量，将每个含菌试验样块置于10mL 剂（见A.3.3.10）中，用电子混匀器（见5.3.6）混合1min。混合溶液在室温下放置60minGB/T 32392.9-2018 信息技术 互操作性元模型框架(MFI) 第9部分：按需模型选择，然后再次 子混匀器混匀1min，平板计数

A.5.4.2.1微生物平板计数

图A.1系列稀释液的制备过程

微生物计数应选择合适的合适的稀释度，每个平板上的菌落总数在15～300之间的可用于进 析，其他平板弃之不用

A.5.5.1试验前微生物数量N

每次试验，每种微生物的两个含菌试验样块，在试验前应进行微生物计数（见A.5.4.2）。含菌试验 样块上微生物数量的计数按照6.4.2进行。两个含菌试验样块的算术平均值（log10CFU/含菌试验样 块）是N。，该数值用于计算洗衣机的除菌减少值， 注：如果使用商品化载体，只有在评估的微生物含量与洗衣机制造商质量控制时评估的微生物负载没有显著差别 （±1log10CFU/含菌试验样块）的条件下，N。才是有效的

A.5.5.2阴性对照（交叉污染）

JR/T 0215.1-2021 资产管理产品介绍要素 第1部分：银行理财产品照A.5.4.2中的方法测定前面无菌载体上的微生物数量。不同的微生物在相应的选择性培养 3.3.3、A.3.3.4、A.3.3.5、A.3.3.7)上进行