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DB32／T 3764-2020 医疗污水病毒检测样品制备通用技术规范

6样品采集、保存、运输和交接

6.2样品保存、运输和交接

7.1.1医疗污水病毒检测样品包括吸附于污水中悬浮颗粒物 内 检测样品。 7.1.2样品制备应尽量于采样现场完成。若现场不满足制备要求，应按照6.2的规定转移至实验室进 行处理。 .1.3根据病毒检测的具体要求，样品制备可选择但不限于下列过程，包括样品的pH调节、预过滤 和病毒富集等步骤。

CJ/T 434-2013 超声波水表分样和装样的器具均应灭菌处理。 管、冻存管等耗材均应采用市售经环氧乙烷灭菌

7.2.3过滤装置中耐高温器材宜使用压力蒸汽灭菌；不耐高温器材宜使用次氯酸钠溶液II（4.7）浸泡 30min，并使用无菌水冲洗3次，

根据水样pH值，便用盐酸溶液（4.9）或氢氧化钠溶液 （4.13）将水样pH调节至7.0~7.5。

根据水样pH值，使用盐酸溶液（4.9）或氢氧化钠溶液I（4.13）将水样pH调节至7.0~7.5。 4预过滤与悬浮颗粒物病毒检测样品制备

7.4预过滤与悬浮颗粒物病毒检测样品制备

7.4.1组装玻璃纤维滤膜过滤装置。

7.4.2取7.3得到的2L水样进行预过滤，以去除水样中悬浮颗粒物，过滤后滤液转移至2L玻璃烧杯

7.5游离态病毒检测样品制备

将采样时间、地点、工艺类型、采样位点、浓缩前体积、浓缩液体积、空白加标回收率、基体 收率、保存方式等参数记录于医疗污水中病毒样品采集和制备记录表中，记录表样式参照表A.

8.1实验过程应按照附录B规定的方法，选择噬菌体MS2作为标准物质，使用双层平板法测定样品 制备前后噬菌体MS2的效价，并计算样品制备过程中噬菌体MS2的回收率。 3.2实验过程应严格设置空白样品、空白加标样品和基体加标样品。 3.3每批样品应设置一个空白样品实验。空白样品实验中病毒不得检出。 3.4每批样品应设置一个空白加标样品实验。空白加标样品实验回收率应不低于50% 3.5每批样品中设置基体加标样品数量不低于总样品的10%，若样品数量不足10个，应至少设置 个基体加标样品实验。基体加标样品实验回收率应不低于10%。

8.1实验过程应按照附录B规定的方法，选择噬菌体MS2作为标准物质，使用双层平板法测定样品 制备前后噬菌体MS2的效价，并计算样品制备过程中噬菌体MS2的回收率。 3.2实验过程应严格设置空白样品、空白加标样品和基体加标样品。 3.3每批样品应设置一个空白样品实验。空白样品实验中病毒不得检出。 3.4每批样品应设置一个空白加标样品实验。空白加标样品实验回收率应不低于50%。 3.5每批样品中设置基体加标样品数量不低于总样品的10%，若样品数量不足10个，应至少设置 个基体加标样品实验。基体加标样品实验回收率应不低于10%。

10. 1. 1 采样过程

采样人员在样品采集全过程，应佩戴医用外科口罩、一次性橡胶手套、一次性工作帽和一次性鞋套 期间采样应佩戴符合N95/KN95及以上标准的医用防护口罩，还应加穿双层一次性乳胶手套、 户服、全面型呼吸防护器或正压式头套（若条件有限，可佩戴封闭式护目镜等）；口罩脏污、变形 有异味或连续佩戴4小时应及时更换

10.2.1运送人员在运送过程中应穿戴防护手套、医用防护口罩、工作服、靴等防护用品。 10.2.2感染性样品在运送过程中发生意外情况导致样品溢出、散落等情况时，应立即向本单位应急事 故小组取得联系，并在受污染地设立隔离标识，其它车辆和行人不得穿过。

10.3.1实验室应符合二级生物安全防护要求。

附录A （资料性附录） 医疗污水病毒检测样品采集和制备记录表 A.1表A.1给出了医疗污水病毒检测样品采集和制备记录表格式。

A.1表A.1给出了医疗污水病毒检测样品采集和制备记录表格式。

附录A （资料性附录） 医疗污水病毒检测样品采集和制备记录表

表A.1医疗污水病毒检测样品采集和制备记录表

B.2.1生化培养箱：培养温度可在0℃~60℃范围内调节。 B.2.2恒温水浴锅：温度可在室温至99℃范围内调节。 B.2.3电子万用炉：功率为1000W。 B.2.4生物安全柜：安全等级II。 B.2.5压力蒸汽灭菌器：灭菌温度可升至121℃，压力可维持0.1MPa~0.15MPa。

B.3质量控制样品的设置

B.3.1实验中应设置空白样品、空白加标样品和基体加标样品。 B.3.2每批样品应设置一个空白样品实验。采用2L无菌磷酸盐缓冲溶液作为空白样品。 B.3.3每批样品应设置一个空白加标样品实验。采用2L无菌磷酸盐缓冲溶液添加1mL噬菌体MS2工作 液（B.1.4）作为空白加标样品。 B.3.4每批样品中设置基体加标样品数量不低于总样品的10%，若样品数量不足10个，应至少设置 个基体加标样品实验。采用2L医疗污水样品添加1mL噬菌体MS2工作液（B.1.4）作为基体加标样品。

B.4噬菌体MS2效价的测定

B.4.1采用双层平板法测定噬菌体MS2效价

B.4.2.1使用电炉加热半固体培养基A组分至融化，降温至45℃~50℃，与培养基B组分按照950：50 的比例混合得到半固体培养基。将混合后的半固体培养基按需分装至无菌离心管中，每管中加入35mL 半固体培养基。分装后半固体培养基放入45℃水浴锅中保持温度，防止凝固。 B.4.2.2取固体培养基平板，将样品名称、实验时间和实验人标记于平板背面，倒置于37℃生化培养 箱预热30min B.4.3待测样品量的选择。待测样品应进行梯度稀释，按照1:10，1:100和1:1000进行稀释，用于后续 测试。 B.4.4向分装有半固体培养基的离心管中加入梯度稀释后待测样品量5mL，宿主细菌E.coli2.5mL 离心管上下颠倒混匀，避免产生气泡。 B.4.5将混有样品和宿主细菌E.col的半固体培养基分别加入到5个已预热的固体平板中，每个平板中 加人8.5mL。待半固体凝固后，倒置放人生化培养箱，37℃培养16h~24h， B.4.6在培养基平板上选择清晰的噬菌斑进行计数。应选择噬菌斑个数介于30~300的平板进行计数， 若噬菌斑个数超过300，则应对样品进行进一步稀释重新开展实验。每个样品对应5个平板的噬菌斑个数 分别记为Plt1,Plt2,Plt3,Plt4和Plt5。

GB 38030.1-2019 内河过闸运输船舶标准船型主尺度系列 第1部分：长江水系B.5.1噬菌体MS2效价的计算

每个样品对应5个平板的噬菌斑个数分别记为Plt1，Plt2，Plt3，Plt4和Plt5，则该样 MS2的效价可按公式（B.1）计算：

Plt1 + Plt2 + Plt3 + Plt4 + Plt5

式中： 噬菌体效价，PFU/mL； 1 V ——样品体积，mL； Plt 平板噬菌斑计数，PFU。

式中： 1 噬菌体效价，PFU/mL； V 样品体积，mL； Plt 平板噬菌斑计数，PFU

式中： 1 噬菌体效价，PFU/mL； V 样品体积，mL； Plt 平板噬菌斑计数，PFU

GB/T 5019.12-2017 以云母为基的绝缘材料 第12部分：高透气性玻璃布补强环氧少胶云母带医疗污水中病毒检测样品制备过程的回收率可按公式（B.2）计算

中： R 回收率，%； I1 样品制备前噬菌体MS2的效价，PFU/mL； 12 样品制备后噬菌体MS2的效价，PFU/mL； V1 样品制备前的体积，mL； V 样品制备后的体积，mL。

2 × V2 × 100% I1 × Vi