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HGT 3950-2007抗菌涂料.pdf

使用保藏时间不超过2周的菌种，将斜面保藏菌转接到平板营养琼脂培养基上，在（37士1）C下培 养18h~20h，试验时应采用连续转接2次后的新鲜细菌培养物（24h内转接的）。

用接种环从A.3.2培养基上取少量（刮1~2环）新鲜细菌，加人培养液中，并依次做10倍递增稀 释液，选择菌液浓度为（5.0~10.0）×10cfu/mL的稀释液作为试验用菌液，按GB4789.2《食品卫生 微生物学检验菌落总数测定》的方法操作

分别取0.4mL~0.5mL试验用菌液（A.3.3）滴加在阴性对照样（A）、空白对照样（B）和抗菌涂料 样（C)上。 用灭菌镊子夹起灭菌覆盖膜分别覆盖在样（A）、样（B）和样（C）上，一定要铺平且无气泡，使菌均匀 接触样品，置于灭菌平皿中，在（37±1）℃、相对湿度RH>90%条件下培养24h。每个样品做3个平 行试验。 取出培养24h的样品，分别加人20mL洗液，反复洗样（A）、样（B）、样（C）及覆盖膜（最好用镊子夹 起薄膜冲洗），充分摇匀后，取洗液接种于营养琼脂培养基（NA）中JGT434-2014 木结构防护木蜡油，在（37士1）C下培养24h~48h后 活菌计数，按GB4789.2《食品卫生微生物学检验菌落总数测定》的方法测定洗液中的活菌数。

将以上测定的活菌数结果乘以1000为样品A、样品B、样品C培养24h后的实际回收活菌数值， 数值分别为A、B、C，保证试验结果要满足以下要求，否则试验无效： 同一空白对照样品B的3个平行活菌数值要符合（最高对数值一最低对数值）/平均活菌数值对数 值≤0.3； 样品A的实际回收活菌数值A应均不小于1.0X10cfu/片，且样品B的实际回收活菌数值B应

HG/T 39502007

本方法用以测定抗菌涂料在霉菌生长的条件下对霉菌的抑制作用。 本方法规定将一定量的孢子悬液喷在待测样品和培养基上，通过直接观测长霉程度来评价抗 科的长霉等级。

B.2.1.1恒温恒湿培养箱（28士1）C和相对湿度RH>90%、冷藏箱0℃~10℃、超净工作台、离心 机、生物光学显微镜、压力蒸汽灭菌器、电热干燥箱 B.2.1.2血球计数板、灭菌平皿、灭菌试管、灭菌移液管、灭菌离心管、灭菌锥形瓶、接种环、酒精灯

B.2.2.1阴性对照样品

B.2.2.1阴性对照样品

B.2.2.2空白对照样品 编号A，是未添加抗菌成分的涂料试板，对照样品要求与A.2.4.2中要求一致，样品试 A.2.4.4进行。

B.2.2.3抗菌涂料试验样品

编号B，是添加抗菌成分的抗菌涂料试板，样品试板制备参照A.2.4.4进行。 以上B.2.2.2和B.2.2.3中所有样品试验前均应进行消毒，建议用无菌水冲洗，然后用灭菌 丁照射灭杂菌5min。

B.2.3试剂和培养基

B.2.3试剂和培养基

B.2.3.1营养盐培养液

本：取上述成分加人1000mL0.05%润湿剂水落液中，加热溶解后，用0.1mo1/LNaOH落液 值使灭菌后为6.0~6.5，分装后置压力蒸汽灭菌器内115C灭菌30min。 营养盐琼脂培养基 00mL营养盐培养液中加人15g琼脂，加热熔化，用0.1mol/LNaOH溶液调节pH值使灭菌 ~6.5，分装后置压力蒸汽灭菌器内115C灭菌30min

B.2.3.2营养盐琼脂培养基

马铃薯用水洗净，去皮切成小块。称取200g，加1000mL蒸馏水，加热煮沸1h。然后用双层 齐出滤液，将滤液加蒸馏水1000mL，加人葡萄糖20g，琼脂20g，加热熔化，用0.1mol/LNaOH 周节pH值使灭菌后为6.0~6.5，115C灭菌30min

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B.2.3.4.2洗脱液

根据产品的使用要求，可增加选用其他菌种作为检测菌种施工组织设计(接待厅）简单，但菌种应由国家级菌种保藏管理中心 提供

将保藏菌接种在PDA斜面培养基试管中，培养7d~14d，使生成大量孢子。未制备孢子悬 不得拔去棉塞。每打开1支只供制备1次悬液，每次制备孢子悬液必须使用新培养的霉菌孢子，

B.3.3孢子悬液制备

在培养7d~14d内B.3.2的PDA斜面培养基中加人少量无菌蒸福水，用火菌接针轻轻刮取表 面的新鲜霉菌孢子，将孢子悬液置于50mL锥形瓶内，然后注人40mL洗脱液。 锥形瓶中加人直径5mm的玻璃珠10~15粒与孢子混合，密封后置水浴振荡器中不断振荡使成团 的孢子散开，然后用单层纱布棉过滤以除去菌丝。将其装人灭菌离心管中，用离心机分离沉淀孢子，去 上清液。再加人40mL洗脱液，重复离心操作3次。 用营养盐培养液稀释孢子悬液，用血球计数板计数，制成浓度为（1×10土2×10）spores/mL的 霉菌孢子悬液。 6种霉菌均用以上方法制成孢子悬液，将6种孢子悬液等量混合在一起，充分振荡使其均匀分散。 混合孢子悬液应在当天使用，若不在当天使用应在3℃～7℃保存，4日内使用。

阴性对照样品（无菌滤纸）铺在平板培养基上，用装有新制备的混合孢子悬液的喷雾器喷孢子 使其充分均匀地喷在培养基和滤纸上。 在温度28℃，相对湿度90%RH以上的条件下培养7d，滤纸条上应明显有菌生长，否则试 认为无效，应重新进行试验。

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同时空白对照样品A、抗菌涂料试板B也分别铺在培养基上，喷孢子悬液，使其充分均匀地喷在培 养基和样品上。每个样品做5个平行试验。 以上样品在温度28℃，相对湿度90%RH以上的条件下培养28d，若样品长霉面积大于10%，可 提前结束实验。

同时空白对照样品A、抗菌涂料试板B也分别铺在培养基上，喷孢子悬液，使其充分均匀地喷在培 养基和样品上。每个样品做5个平行试验。 以上样品在温度28℃，相对湿度90%RH以上的条件下培养28d，若样品长霉面积大于10%GB51102-2016标准下载，可 提前结束实验。

取出样品需立即进行观察，空白对照样品A长霉面积应不小于10%，否则不能作为该试验的空白 对照样品。每种样品5个平行中以3个以上同等级的定为该样品的长霉等级。 样晶长霉等级： 0级不长，即显微镜（放大50倍）下观察未见生长。 1级痕迹生长，即肉眼可见生长，但生长覆盖面积小于10%。 2级生长夏盖面积大于10%