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婴儿配方乳粉中阪崎克罗诺杆菌解旋酶恒温基因扩增检测方法的建立

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    摘要:目的:建立一种检测婴儿配方乳粉中阪崎克罗诺杆菌的解旋酶恒温基因扩增方法。方法:根据阪崎克罗诺杆菌,礤基因设计特异性引物,优化解旋酶恒温基因扩增法反应条件uvrD helicase、T4 gp32的浓度,人工添加阪崎克罗诺杆菌确定检出限,多种致病菌在建立的解旋酶恒温基因扩增体系中扩增验证特异性,电泳检测扩增产物。结果:解旋酶恒温基因扩增法检测婴儿配方乳粉中阪崎克罗诺杆菌得到与设计序列长度一致的100 bp基因片段,检出限为10 CFU/g,优化反应条件UvrD helicase、T4 gp321拘终浓度分别为0.1、5.0 rtg。结论:解旋酶恒温基因扩增法用于检测婴儿配方乳粉中阪崎克罗诺杆菌的特异性强、灵敏度高、耗时短,为婴儿配方乳粉中阪崎克罗诺杆菌的快速检测提供了新的方法。

    关键词:解旋酶恒温基因扩增法;婴儿配方乳粉;阪崎克罗诺杆菌;检测

 

    食品安全问题是关系到人民大众切身利益的敏感话题。婴儿配方乳粉是针对于新生儿的特定食品,营养丰富,能够满足婴儿生长发育的日常需要,其安全性尤为重要。阪崎克罗诺杆菌是婴儿配方乳粉主要的微生物安全指标,其条件致病性和婴儿免疫系统发育的不完全性易对婴儿身体健康造成伤害,因此阪崎克罗诺杆菌的检测与控制已经成为影响婴儿食品安全的重要因素。

    分子生物学技术的飞速发展,越来越多的技术已经应用于致病菌检测领域n‘101,主要有:聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术、实时荧光PCR技术、荧光探针检测技术、基因芯片技术。依赖解旋酶恒温基因扩增(helicase.dependent isothermal DNAamplification,HDA)方法是近年来以PCR法为基础发展起来的体外恒温基因扩增方法,具有所需仪器设备简单、反应时间短、特异性强、假阳性低等优点,能够满足食品中致病菌快速检测的需求。

    本研究拟将HDA方法应用于婴儿配方乳粉中阪崎克罗诺杆菌的检测中,利用HDA法自身的优势,开发婴儿配方乳粉中阪崎克罗诺杆菌的HDA快速检测方法,以期为检验检疫部门提供更多的方法,为HDA法在其他致病菌检测上的推广提供一定参考。

 

 全文下载:婴儿配方乳粉中阪崎克罗诺杆菌解旋酶恒温基因扩增检测方法的建立.pdf


作者:admin 来源:网络收集 发布时间:2017年03月30日