1 引言
过氧化苯甲酰（BPO）是一种强氧化剂。它常被用作面粉的增白剂，使面粉中由小麦胚乳产生的黄色胡萝卜素迅速完全地与之反应，从而将面粉脱色增白。另外，BPO 又具有促“熟化”作用。它的还原产物苯甲酸（BA）可抑制蛋白酶和微生物的生长，避免蛋白质的分解，提高面食制品的储藏性能［1］。但是，由于它能破坏!-胡萝卜素、VB、VA、VE等营养成分，其还原产物BA 的摄入过多也不利于人体健康。所以国内外都规定了限量标准，我国规定最大用量为0.06 g/kg。
目前，常用碘量法测定BPO［2］，但只适用于常量的分析（如稀释过氧化苯甲酰），对于面粉中微量的BPO 的测定，还没有合适的方法可依。因此，建立灵敏准确的分离和测定面粉中BPO 的方法，对于小麦粉质量的监测和保障人们身体健康具有十分重要的意义。
我们用CH3CH2OH 提取面粉中的BPO，再用KOH 把它还原成BA，采用高效液相色谱法进行分离和测定，具有良好的准确度和重现性，用于实际样品测定，结果令人满意。
2 实验部分
2.1 仪器与试剂
LC-6A 高效液相色谱系统（日本岛津公司）。包括：LC-6A 高压溶剂输送泵；CTO-6A 柱温箱；SCL-6B系统控制器；C-R4A 色谱数据处理机；SPD-6AV 紫外与可见检测器；7125 六通进样阀；PH-3C 酸度计（上海雷磁仪器厂）。
过氧化苯甲酰标准品（AR，天津市化学试剂一厂），经过精制；苯甲酸（AR）、甲醇（GR）（北京化工厂）；其它试剂均为分析纯。实验用水为重蒸水。
2.2 色谱条件
色谱柱：Shim-pack CLC ODS（4. 6 mm X 150 mm，5"m ，日本岛津公司）；流动相：CH3OH/H2O（用H3PO4调至pH = 3.0）= 812（!/ !）；流速：0.7 mL/min；柱温：35C；检测波长：UV-230 nm。
2.3 定量方法
外标法定量，BPO 标准溶液采用与样品相同的方法处理后进样，绘制工作曲线。
2.4 样品采集与预处理
被检样品在面粉销售市场随机抽取，混匀，具代表性。准确称取0. 5 g 左右的样品，置于50 mL 具塞锥形瓶中。加入4 mL 无水乙醇，盖紧，摇匀，超声波振荡提取15 min，4000 r/min 离心分离，吸取上清液2.0 mL 于10 mL 容量瓶中，加入1 mL 0.1 mol/L KOH 乙醇溶液，室温下超声波振荡5 min 混匀，加入5 mL H2O，放置12 h，用0.1 mol/L 的H3PO4调节pH 值为3.0，用水稀释至刻度，摇匀，用孔径为0.45"m 的微孔滤膜过滤，作为供试液。
3 结果与讨论
3.1 萃取剂的选择
加在面粉中的BPO 在保存过程中大部分已被还原为BA。但由于面粉中BPO 和BA 的含量很低，有效的提取对于测定至关重要。BPO 的极性很小，可以选择弱极性或非极性的溶剂将其溶出。实验发现，BPO 在乙醚、丙酮和苯等非极性溶剂中的溶解效果比在乙醇中好，但是这些溶剂在溶解BPO 的同时也溶解了面粉中其它脂溶性物质，必须进行多次提纯才能除去这些干扰物，使分析工作复杂化。而乙醇的极性较大，脂溶性较差，它既能使BPO 和BA 溶解，又不至于引入脂溶性杂质，故选择乙醇作为萃取剂。
3.2 还原条件的选择
碘化钾在酸性介质中能把BPO 快速、完全的还原为BA，但过量的KI 在190 ~ 250 nm 波长范围内有较强的紫外吸收，严重的干扰测定，不宜采用。FeSO4和Na2 SO3与BPO 的氧化还原反应也较迅速，但Fe2 + 有颜色，SO2 -3也有紫外吸收，两者的存在对检测都有干扰，目前还没找到除去反应体系中的Fe2 + 和SO2 -3的有效方法，也都不适合用作还原剂。
我们选用KOH 乙醇溶液作为介质，能够定量的使BPO 还原成BA（实际上是苯甲酸钾），过量的KOH 可通过酸化除去。我们对这一反应作了跟踪研究：取0.5 g/L 的BPO 标准溶液1 mL 置于25 mL 容量瓶中，加入0.1 mol/mL 的KOH 乙醇溶液1 mL，振荡混匀，用水稀释至刻度，在室温下放置，每隔2 1取出1 mL，以H3PO3酸化至pH = 3.0，在拟定的色谱条件下进样测定BA，结果发现，开始峰面积随着时间的增加而增加，12 1 之后基本保持不变，故还原时间选定为12 1。分别在1 mL 的0.5 mg / mL BPO标准溶液中加入0.25、0.50、1.0、1.5、2.0、2.5 mL 的0.1 mol / mL 的KOH 乙醇溶液，按上述方法处理，测定BA，结果发现，开始峰面积随KOH 加入量的增加而增加，当加入0.5 mL 以上时，峰面积不再改变，因此，选择KOH 的加入量为1 mL。
…………