2012年2月中旬，美国斲丧者建议组织民众好处科学中心（ＣＳＰＩ）发布了一份声明，个中声称，在可乐饮料中发明高含量的化学因素４－甲基咪唑。
４－甲基咪唑是一种存在于焦糖剂中的化学物质。它是在出产焦糖色素时发生的。焦糖色素能使可乐饮料酿成棕褐色。在尝试中发明，4-甲基咪唑能导致动物长肿瘤，有也许给人体带来致癌风险。
天下卫生组织应承在食品中添加含有4-甲基咪唑的焦糖色素，且对付4-甲基咪唑的剂量有所界定，即每千克不能高出200毫克。中华人民共和国尺度GB 8817-2001《食物添加剂 焦糖色（亚**铵法、氨法、平凡法）》中划定，4-甲基咪唑在液体食物中含量小于0.02%，即每千克液体中4-甲基咪唑含量小于200毫克，与天下卫生组织要求沟通。
在尺度GB 8817-2001《食物添加剂 焦糖色（亚**铵法、氨法、平凡法）》中，要求尝试中所用试剂和仪器装备除出格注明外，均回收说明纯试剂、蒸馏水或去离子水及尝试室常用仪器装备。4-甲基咪唑的测定首要回收薄层色谱法来举办检测。
薄层色谱法具有快速、简朴等特点。可是对比液相或气相色谱来说，存在定性错误的也许性，假如被测物质和尺度物质不是统一个物质，而他们的保存时刻同等，则会发生定性错误。因此，许多处所选择行使液相色谱来检测4-甲基咪唑，并出台了响应的处所尺度。下面将按照河北省处所尺度DB13/T 1116-2009《焦糖色中的4-甲基咪唑的测定 高效液相色谱法》对检测要领做先容。
6说明步调
6.1 样品处理赏罚 精确称取3g样品（准确至0. 001 g)，加15mL水消融，移入250 mL分液漏斗中，加100 g/L碳酸钠溶液15 mL，加*一无水乙醇萃取液60 mL，强烈振摇5 min。静置分层后，将有机相移入另一分液漏斗中，水相再按同样要领萃取一次，归并有机相；用100 g/L碳酸钠溶液洗涤提取液3次，每次30mL。然后将有机相通过无水**钠滤入旋转蒸发瓶中，50℃浓缩至近干，取下，以水消融残渣并定容至10mL，经0.45μm微孔膜过滤后供HPLC说明。
6. 2测定
6.2.1 HPLC参考前提
说明柱：C18 4. 6 mm×250 mm粒度5 μm。
活动相：甲醇: 0. 05 mol/L磷酸二氢钾缓冲液（(pH 3. 5，含0. 1％庚烷磺酸钠）=5: 95。
波长：210nm。
流速：1. 0 mL/min。
6.2.2尺度曲线：别离进尺度系列溶液各10 μL，举办HPLC说明，然后以峰面积为纵坐标，以4一甲基咪唑的含量为横坐标，绘制尺度曲线。
6.2.3试样测定：汲取6. 1处理赏罚后的试样溶液10 μL举办HPLC说明，测定其峰面积，从尺度曲线查得测定液中4一甲基咪唑的含量
7功效计较
试样中4一甲基咪唑的含量按下式计较：
式中：
X一试样中4一甲基咪唑的含量，单元为毫克每千克（mg/kg) ;
c一由尺度曲线上查得进样液中4一甲基咪唑的量，单元为微克每毫升（μg/mL) ;
V一试样稀释液总体积，单元为毫升（mL) ;
m一试样质量，单元为克（g) ;
计较功效保存两位有用数字。
在行使液相色谱检测时，要求必需行使切合中华人民共和国尺度GB 6682-2008的一级水。其他各类尺度溶液的设置起码必要用到二级水。瑞枫出格提供Direct-Pure EDI与PURIST的组合套装，可以提供高纯水及超纯水，满意全方位的尝试室用水需求。Direct-Pure EDI高纯水体系选用Siemens公司的EDI，以自来水为进水，提供不变优质的高纯水，产物到达同类产物先历程度。PURIST系列超纯水体系，美丽小巧，行使轻盈；它以纯水为进水，出产超纯水。水质高出或到达GB以及ASTM、CAP、CLSI的一级水尺度。该组合套装，可以担保用户在行使顶用水无忧。瑞枫纯水体系已通过FCC、CE等多种认证，同时有专业的验证工程师，提供所需的验证处事支持，以及通过各类尺度所需的3Q认证，有助于帮忙用户通过GMP、GLP等系统认证，让用户在行使高品格产物的同时，享受到专业殷勤的处事。
为更好地掩护HPLC仪器，一样平常上样前需将溶液预先过滤，除去溶液中颗粒及微生物，防备色谱柱堵塞、破坏泵等环境产生，从而担保仪器的操纵机能及延迟仪器行使寿命。为此，瑞枫提供PES、PTFE、Nylon、MCE等多种针头式过滤器，合用于各类有机相及水相的样品过滤。
据专门风称，固然４－甲基咪唑有较量大的危害性，但只要它是正规食物添加剂焦糖中的物质，含量在应承的范畴内，那么对人体将不会有太大的侵害。凭证人们正常斲丧程度，假如4-甲基咪唑不超出人体逐日应承摄入量，则不能得出危害康健的结论。迄今为止，尚未见到食物中4-甲基咪唑导致人体侵害的临床报道。