肉制品中亚**盐的测定

一、目的与要求：
    1、明确亚**盐的测定与控制成品质量的关系。
    2、明确与掌握盐酸萘乙二胺法的基本原理与操作方法。
二、原理：
    样品经沉淀蛋白质，除去脂肪后，在弱酸条件下**盐与对氨基苯磺酸重氮化后，生成的重氮化合物，再与萘基盐酸二氨乙烯偶联成紫红色的重氮染料，产生的颜色深浅与亚**根含量成正比，可以比色测定。反应式如下：

三、试剂与仪器
   1、亚铁氰化钾溶液：称取106克亚铁氰化钾[K₄Fe₉(CN)₅.3H₂O]，溶于水后，稀释至1000毫升。
    2、乙酸锌溶液：称取220克乙酸锌[Zn(CH₂C00)₂·2H₂0]，加30毫升冰乙酸溶于水，并稀释至1000毫升。
    3、饱和硼砂溶液：称取5克硼酸钠(Na₂B0₇·10H₂0)，溶于100毫升热水中，冷却后备用。
    4、0.4％对氨基苯磺酸溶液：称取0.4克对氨基苯磺酸，溶于100毫升20％的盐酸中，避光保存。
    5、0.2％盐酸萘乙二胺溶液：称取0.2克盐酸萘乙二胺，溶于100毫升水中，避光保存。
    6、亚**钠标准溶液：精密称取0.1000克于硅胶干燥器中干燥24小时的亚**钠，加水溶解移入500毫升容量瓶中，并稀释至刻度。此溶液每毫升相当于200微克亚**钠。
    7、亚**钠标准使用液：临用前，吸取亚**钠标准溶液5.00毫升，置于200毫升容量瓶中，加水稀释至刻度，此溶液每毫升相当于5微克亚**钠。
    8，小型绞肉机。
    9、分光光度计。
 四、操作方法：
    1、样品处理：称取5.0克经绞碎混匀的样品，置于50毫升烧杯中，加工2.5毫升饱和溶液，搅拌均匀，以70℃左右的水约30毫升将样品全部洗入500毫升容量瓶中，置沸水浴中加热15分钟，取出后冷至室温，然后一面转动一面加入5毫升亚铁氰化钾溶液，摇匀，再加入5毫升乙酸锌溶液以沉淀蛋白质，加水至刻度，混匀，放置0.5小时，除去上层脂肪，清液用滤纸过滤弃去初滤液30毫升，滤液备用。
    2、测定
    吸取40毫升上述滤液于50毫升比色管中，另吸取0.00、0.20、0．40、0．60、0.80、1.00、1.50、2.00、2.50毫升亚**钠标准使用液(相当于0、1、2、3、5、7、10、12.5微克亚**钠)，分别置于50毫升比色管中，于标准与样品管中分别加入2毫升0.4％对氨基苯磺酸溶液，混匀，静置3-5分钟后各加入1毫升0.2％盐酸萘乙二胺溶液，加水至刻度，混匀，静置15分钟，用2厘米比色杯，以零管调节零点，于波长538nm处测吸光度，绘制标准曲线比较。
计算：  X=(A×1000)/(m×40/500×1000×1000)
X：样品中亚**盐的含量，g／kg；
m：样品质量，g；
A：测定用样液中亚**盐的含量，ug