分光光度法 〔合用于牛肉末里的抗坏血酸盐、苯甲酸盐、山梨酸盐和亚**盐〕
A 试剂
A.a 对品红酸性溶液
将100mg对品红氯化物和200ml水放入1L容量瓶内。插手160ml HCl(1+1)并稀释至刻度。在行使前安排12h。
A.b 四氯合汞酸钠溶液
消融4.7gNaCl和10.9gHgCl2于约1900ml水中，用水稀释至2L。
A.c 甲醛溶液
15mg/100ml。2ml福尔马林用水稀释到100ml。取出2ml进一步用水稀释至100ml。
A.d 亚**钠溶液
1mg/ml。将100mg Na2SO3消融于100ml四氟合汞酸钠溶液中。
A.e 抗坏血酸溶液
1mg/ml。将100mg USP抗坏血酸溶于100ml水中。应在行使前配制。
A.f 乙酸-偏磷酸溶液
10g HPO3片消融于HOAc(1+1)中，用HOAc(1+1)稀释至100ml。
A.g 靛酚尺度溶液
25μg/ml。将50mg2，6-二氯靛酚钠盐消融于50ml含有42mgNaHCO3的水中。强烈振动，用水稀释到200ml。通过带槽纹的滤纸过滤，放在琥珀色具玻璃塞瓶内于冰箱中生涯。$$按下述要领标定：移取三份2.0ml的抗坏血酸溶液(e)，别离放入盛有0.4ml殽杂酸溶液(f)和23ml水的3个50ml锥形瓶中。用25ml靛酚尺度溶液快速滴定到从桃红－紫红终点，不变10s。〔每次滴定约必要15ml靛酚溶液，读数应准确到0.1ml〕。靛酚的浓度用抗坏血酸的毫克数/ml暗示。天天对新配制的抗坏血酸溶液举办标定。
A.h 苯甲酸钠溶液
2mg/ml。将200mg苯甲酸钠消融于100ml水中。
A.I 山梨酸钾溶液
1mg/ml。将100mg山梨酸钾消融于100ml水中。
B 亚**盐尺度曲线的制备
用移液管取0，1，2，3，4，5和6mlNa2SO3溶液别离放入7个100ml容量瓶中。向每个瓶中插手50ml四氯合汞酸钠溶液并用水稀释至刻度。从每个容量瓶中取1.0ml溶液别离放到200mm试管。插手5.0ml品红溶液，殽杂，插手10mlCH2O溶液，混匀，安排30min。在550nm处以0ml尺度溶液为参比测定吸光度A。以A对mgNa2SO3/ml〔别离为0.01-0.06mg/ml〕作图。
C 苯甲酸和山梨酸尺度曲线的制备
用移液管汲取1，2，3，4，5和6ml苯甲酸钠溶液别离放入6个100ml容量瓶中。用水稀释至刻度。从每个容量瓶中别离移取5ml溶液放入6个50ml具玻璃塞量筒中。插手0.4ml HCl(1+1)和石油醚到50ml刻线处。塞住，振荡1min。用5ml水制备空缺。在记录式分光光度计上从300到200nm扫描提取液。在约225nm最大接收处读出吸光度A，减去空缺。然后以△A对mg苯甲酸钠/5ml〔别离为0.1－0.6mg〕作图。$$用相似的要领制备山梨酸钾的尺度曲线。以在约250nm处最大接收的△A对mg山梨酸钾/5ml〔别离为0.05－0.3mg〕作图。
D 样品溶液的配制
称取20g牛肉末放入200ml烧杯，插手85ml水，用玻璃棒搅拌并混匀，安排10min，安排时刻不要太长。将溶液通过放有松玻璃毛塞的漏斗倾到第二个烧杯里。立即取下5ml溶液举办亚**盐的测定。要担保提取液体积是100ml〔插手的85ml水+由牛肉获得的液体〕。
E 测定
E.a 亚**盐
汲取5ml滤过的提取液，放入盛有5.0ml四氯合汞酸钠溶液的200mm试管中，殽杂。转移1ml稀溶液到第二个200mm试管中，插手5mlp-蔷薇苯胺〔对品红〕溶液，殽杂。插手10.0mlCH2O溶液，殽杂，安排30min。假如呈现紫赤色，用玻璃纤维过滤器过滤，按尺度曲线的制备要领测定吸光度A。1ml试液代表0.1g肉，以是每0.01mg相等于0.01%的Na2SO3。假如颜色太深，可用四氯合汞酸钠溶液进一步稀释原试管中的溶液。
E.b 苯甲酸盐
汲取5ml滤过的提取液放入50ml具玻璃塞的量筒中，按C中制备尺度曲线的步调操纵。从300到200nm扫描溶液。假若有苯甲酸盐存在，在约225nm处有峰呈现，用尺度曲线举办定量。5ml试液代表1g肉，以是每0.1mg相等于0.01%苯甲酸钠。
E.c 山梨酸盐
汲取5ml滤过的提取液放入50ml具玻璃塞的量筒中，按C中制备尺度曲线的步调操纵。从300到200nm扫描溶液。假若有苯甲酸盐存在，在约225nm处有峰呈现，用尺度曲线举办定量。5ml试液代表1g肉，以是每0.1mg相等于0.01%苯甲酸钠。
E.d 抗坏血酸盐
汲取25ml滤好的提取液放入125ml锥形瓶里。插手0.4mlHOAc-HPO3溶液，殽杂。插手2.0ml靛酚溶液。假如溶液转移酿成紫赤色，并保持10s，就暗示没有抗坏血酸存在。〔不要等10s以上，由于染料自己会退色〕。$$假如染料退色〔溶液为灰色〕，用滴定管以0.5ml增量滴加靛酚溶液到紫赤色终点并不变10s〔不要等10s以上，由于颜色在安排时退去〕。试验中插手的染料的最概略积为2.0ml。$$ mg抗坏血酸/100g＝〔V×E〕(100ml/25ml)×(100/W)$$式中，V＝靛酚溶液的毫升数；E＝mg抗坏血酸/ml靛酚尺度溶液，W＝样品重量〔20g〕。